HL-7702人肝正常细胞[L-02]培养指导书

一、细胞培养条件

细胞名称： HL-7702人肝正常细胞[L-02]
生长特性： 贴壁生长
冻存条件： 无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系： 1640 + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法： 初次建议1:2传代。每2天更换一次培养基。

备注： 使用无菌离心管收集瓶内培养基，留作过渡对比培养。如果对比培养效果不理想，建议直接购买我们的完整培养基。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，待细胞达到良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，以确保运输细胞的有效性。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱内静置3-4小时以稳定细胞状态，然后进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并不同倍数拍照保存（建议拍摄40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是售后服务的重要依据，如果未提供照片，默认细胞到达时状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞覆盖培养瓶面积未超过80%时，将培养液收集至离心管中，保留5ml培养基，放入37℃、5% CO2环境中；如果细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃孵箱中消化1-2分钟。观察细胞状况，如果细胞大部分变圆并脱落，立即取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml培养基重悬。
4. 按1:2比例进行分瓶传代，补充新的培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，并用PBS洗涤细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察至细胞变圆后加入5ml完全培养液终止反应，轻轻吹打使其脱落，转移至15ml离心管中并1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml 雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后置入冻存管中。
4. 将冻存细胞置于-80℃冰箱中，如果后续转入液氮罐，需在-80℃中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 取出液氮中的冻存管（佩戴防护装备），快速置入37℃水浴中解冻直至无结晶，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清，重悬细胞于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基，继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中容易脱落，这属于正常现象。如果脱落现象较严重，可以将培养瓶中的所有培养液收集到离心管中，离心后进行对比培养。进行细胞传代时，需注意操作步骤并根据培养状态进行适当处理。

五、售后条款

1) 可重发的情况

- 运输过程中细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等情况可重发。
- 收到后48小时内有真实实验结果的细胞污染问题可重发。
- 常温发货细胞与干冰冻存发货的细胞在规定时间内复苏后未存活可重发，需提供细胞状态照片。
- 如收到细胞后出现污染情况，重新发货的标准依据为技术人员的判断。

2) 不可重发的情况

- 客户自身造成的污染问题不予重发。
- 不当操作导致细胞状态不佳不予重发。
- 使用非本库推荐的培养体系导致的细胞状态问题不予重发。
- 未提供细胞培养前3天的照片，或者收到后未及时告知的情况也不予重发。

在您的细胞培养过程中，我们的 品牌Z6·尊龙凯时 将始终为您提供支持与服务！如有任何问题，欢迎随时联系我们。